Каково Северное Пятно?
Северная гибридизация пятна - методика, которая используется, чтобы обнаружить РНК посредника (mRNA) уровни в образце, и определить количество количества mRNA, который присутствует. Хотя другие более сильные методики действительно существуют, северное пятно остается стандартом из-за его простоты и непринужденности использования. Северная методика отсоса также учитывает прямое сравнение многократных образцов в единственном эксперименте.
РНК Посредника является типом нуклеиновой кислоты, которая произведена, когда ген выражается. Ген, который включен и функционален в пределах клетки, расшифрован в mRNA. mRNA тогда транспортируется в цитоплазму клетки, где это переведено на белок. Северный блот-анализ клеточной mRNA банки для отбора проб поэтому обеспечивает полезную информацию о множестве белков, которые производит клетка.
В северном пятне, mRNA извлечен из клеток и пробегается электрофорез агарозного геля денатурирования, который позволяет mRNA в образце быть отделенным согласно размеру. Образцами mRNA молекул известных размеров управляют в то же самое время, чтобы обеспечить контроль. Как только электрофорез полон, образцы переданы и остановлены на твердой мембране, обычно сделанной из материала, такого как нейлон. Образцы тогда подвергнуты действию исследований меченого радиоактивного изотопа в течение нескольких часов перед анализом. Во время анализа, mRNA, который скрестился к исследованию меченого радиоактивного изотопа, может быть ясно обнаружен, используя рентген.
Северная методика отсоса учитывает наблюдение за образцами экспрессии гена между различными типами ткани. РНК посредника, извлеченная из клеток всевозможных тканей и типов органа, может быть сравнена, и клеточные ответы на напряжение, инфекцию, и много других стимулов могут быть исследованы. Смотря на различия в mRNA отжимании под различными условиями, ученый может определить, какие типы белков клетка производит в ответ на определенные стимулы. Это может дать представления о функциях неизвестных белков, или в случае известных белков, информации о клеточных ответах на рассматриваемые стимулы.
Например, северное пятно может показать, что отжимание неизвестного белка увеличивается в ответ на присутствие определенного токсина. Это могло тогда теоретически оцениваться, что белок включается в восстанавливании токсичности, возможно транспортируя химикат из клетки или преобразовывая это в метаболит. Если известные белки находятся под экспертизой, документируя изменения в отжимании белка может предоставить информацию об ответе непосредственно. Если бы отжимание известного молекулярного транспортера было увеличено, например, то можно было бы подтвердить, что клеточный ответ на токсин должен транспортировать токсин из клетки.